Prosjektnummer
900988
Validering av bioassay med praziquantel og bendelmark (Eubothrium sp.)
Sammendrag av resultater fra prosjektgruppens sluttrapport
Et bioassay med bendelmark (Eubothrium sp.) for måling av følsomhet mot legemiddlet praziquantel er utviklet og validert. Utvikling og validering er gjennomført ved å behandle fisk med anbefalt dose ved intubasjon, og sammenligne effekten med resultat fra en in vitro test (bioassay) med innsamlede bendelmark fra samme populasjon (lokalitet).
Det er utført totalt 10 tester (2005: 3, 2007: 2, 2008: 2, 2014: 3). I den validerte testen benyttes 6 konsentrasjon praziquantel (0, 0.01, 0.1, 1.0, 10.0 og 100 ppm). Eksponeringstiden er 12 timer ved 12 °C. Ved evaluering klassifiseres bendelmarken som død eller levende på grunnlag av bevegelse.
Resultatet benyttes til å estimere LC50-konsentrasjon av praziquantel (LC50 – “Lethal Concentration” – som dreper 50 % av individene i testen). Følsom: LC50 <1.0 ppm, Resistent: LC50 >1.0 ppm.
Resultatet fra prosjektet er også benyttet til å utvikle en forenklet test (en-dose bioassay) med kun kontroll gruppe og en konsentrasjon (1.0 ppm), til å skille mellom følsom og resistent bendelmark. Eksponeringstiden er 12 timer ved 12 °C. Følsom: >70 % dødelighet, resistent: <70 % dødelighet. Begge testene forkastes dersom det er ≥20 % døde i kontrollgruppen. Et en-dose bioassay bør benyttes dersom antallet bendelmark til testing er <60 individer, dvs mindre enn 10 i hver konsentrasjon når 6 konsentrasjoner benyttes.
Resultatet benyttes til å estimere LC50-konsentrasjon av praziquantel (LC50 – “Lethal Concentration” – som dreper 50 % av individene i testen). Følsom: LC50 <1.0 ppm, Resistent: LC50 >1.0 ppm.
Resultatet fra prosjektet er også benyttet til å utvikle en forenklet test (en-dose bioassay) med kun kontroll gruppe og en konsentrasjon (1.0 ppm), til å skille mellom følsom og resistent bendelmark. Eksponeringstiden er 12 timer ved 12 °C. Følsom: >70 % dødelighet, resistent: <70 % dødelighet. Begge testene forkastes dersom det er ≥20 % døde i kontrollgruppen. Et en-dose bioassay bør benyttes dersom antallet bendelmark til testing er <60 individer, dvs mindre enn 10 i hver konsentrasjon når 6 konsentrasjoner benyttes.
-
Rapport: Protokoll: Bioassay med bendelmar (Eubothrium sp.) og praziquantel
SEVO. November 2014. Av Sigmund Sevatdal.
-
Sluttrapport: Validering av bioassay med praziquantel og bendelmark (Eubothrium sp.)
VESO. 1.12.2014. Av Sigmund Sevatdal.
Bendelmark er igjen blitt et problem, og det er behov for en diagnostisk metode for å undersøke følsomhetsstatus før eventuell behandling med praziquantel.
Dette prosjektet vil bygge på en av konklusjonene i sluttrapporten til prosjektet “Resistens hos bendelorm (Eubothrium sp.)”, se “Pilotprosjekt på bendelmark” (FHF-551024), som ble gjennomført i perioden 2007–2008:
“Et bioassay for måling av følsomhet for praziquantel er utviklet og standardisert. Dette bioassayet bør evalueres med resistente populasjoner når dette er mulig”.
Det ble utført 5 bioassay med bendelmark i forrige prosjekt. De 4 siste ble definert som følsomme. Det som gjenstår er derfor å validere denne testen med resistente populasjoner av bendelorm.
Dette prosjektet vil bygge på en av konklusjonene i sluttrapporten til prosjektet “Resistens hos bendelorm (Eubothrium sp.)”, se “Pilotprosjekt på bendelmark” (FHF-551024), som ble gjennomført i perioden 2007–2008:
“Et bioassay for måling av følsomhet for praziquantel er utviklet og standardisert. Dette bioassayet bør evalueres med resistente populasjoner når dette er mulig”.
Det ble utført 5 bioassay med bendelmark i forrige prosjekt. De 4 siste ble definert som følsomme. Det som gjenstår er derfor å validere denne testen med resistente populasjoner av bendelorm.
• Å ferdigutvikle bioassay med praziquantel og bendelmark, ved å gjennomføre validering med 2 ulike populasjoner resistent bendelmark.
• Å implementere metoden ved å avholde seminar/ videokonferanse til veterinærer og fiskehelsepersonell.
• Å undersøke effekten av synergisten PiperonylButOksid (PBO) for å undersøke om denne øker effekten av praziquantel. Dersom PBO har effekt vil dette indikere mekanismen bak resistens hos bendelmark.
• Å implementere metoden ved å avholde seminar/ videokonferanse til veterinærer og fiskehelsepersonell.
• Å undersøke effekten av synergisten PiperonylButOksid (PBO) for å undersøke om denne øker effekten av praziquantel. Dersom PBO har effekt vil dette indikere mekanismen bak resistens hos bendelmark.
Et validert bioassay med praziquantel og bendelorm vil være et nyttig diagnostisk verktøy for å undersøke følsomhetsstatus til bendelmark før en eventuell behandling med praziquantel. Ved behandlingssvikt vil et bioassay kunne verifisere om dette skyltes resistens eller andre årsaker.
Dersom PBO har effekt ved å øke effekten av praziquantel, kan dette vurderes som et legemiddel.
Dersom PBO har effekt ved å øke effekten av praziquantel, kan dette vurderes som et legemiddel.
Validering skal gjennomføres ved å undersøke 2 populasjoner med bendelmark med ulik grad av resistens. I hvert tilfelle må resistens valideres med oral intubasjon.
Det er derfor nødvendig å teste resistens med intubering av praziquantel i fisk med bendelorm. Det tas ut bendelorm fra fisk av samme populasjon som testes med bioassay. Dersom resultatet av intubasjon med praziquantel bekrefter resistens, og bioassayet viser samme resultat, bør testen være validert.
Resultatene vil også bli sammenlignet med resultatene fra bioassay med følsomme populasjoner som ble gjennomført i 2007–2008.
Det er derfor nødvendig å teste resistens med intubering av praziquantel i fisk med bendelorm. Det tas ut bendelorm fra fisk av samme populasjon som testes med bioassay. Dersom resultatet av intubasjon med praziquantel bekrefter resistens, og bioassayet viser samme resultat, bør testen være validert.
Resultatene vil også bli sammenlignet med resultatene fra bioassay med følsomme populasjoner som ble gjennomført i 2007–2008.
Leveranser fra dette prosjektet vil være følgende:
• En protokoll som beskriver gjennomføring av bioassay med bendelmark, inkludert grenseverdier for kategorisering av følsom eller resistent populasjon.
• Seminar etc., der metoden demonstreres for veterinærer og fiskehelsepersonell.
• Resultat fra testing med PBO. Dette vil avgjøre om PBO er aktuell som synergist.
• En protokoll som beskriver gjennomføring av bioassay med bendelmark, inkludert grenseverdier for kategorisering av følsom eller resistent populasjon.
• Seminar etc., der metoden demonstreres for veterinærer og fiskehelsepersonell.
• Resultat fra testing med PBO. Dette vil avgjøre om PBO er aktuell som synergist.
-
Sluttrapport: Validering av bioassay med praziquantel og bendelmark (Eubothrium sp.)
VESO. 1.12.2014. Av Sigmund Sevatdal.