Prosjektnummer
900062
Forbedret analysemetodikk peptidstørrelsefordeling
Det er utviklet, optimalisert og validert ny forbedret analysemetodikk med bruk av HPLC-SEC (Size Exclusion Chromatography). Av de ulike kolonnene som ble undersøkt var det Superdex Peptid-kolonnen ved 30 % acetonitril, 0,1 % TFA som viste best lineære forhold innenfor måleområdet mellom 20 000 og 200 dalton. Superdex peptid-metoden viser seg å være robust ift. bytte og skifte av eluent, samt svært reproduserbar.
Superdex Peptid-metoden var det beste valget for å bestemme molekylvektsfordeling for forbindelser < 20 000 Da, og for de naturlige prøvene som inngikk i forsøkene. Dersom fordelingen er ønskelig for større peptider/proteiner er det andre kolonner som vil fungere bedre.
Det er også et klart pluss med metoden at man kan isolere de ulike fraksjonene etter separering på kolonnen og dampe av alle bestanddeler i den mobile fasen for deretter å gå videre med andre teknikker (ionebytterkromatografi, revers-fase HPLC) der man kan få nye separasjoner og mulighet til å identifisere de ulike peptider.
Superdex Peptid-metoden var det beste valget for å bestemme molekylvektsfordeling for forbindelser < 20 000 Da, og for de naturlige prøvene som inngikk i forsøkene. Dersom fordelingen er ønskelig for større peptider/proteiner er det andre kolonner som vil fungere bedre.
Det er også et klart pluss med metoden at man kan isolere de ulike fraksjonene etter separering på kolonnen og dampe av alle bestanddeler i den mobile fasen for deretter å gå videre med andre teknikker (ionebytterkromatografi, revers-fase HPLC) der man kan få nye separasjoner og mulighet til å identifisere de ulike peptider.
-
Sluttrapport: Forbedret analysemetodikk for peptidstørrelsesfordeling
RUBIN-rapport nr 200. Av Jarle Wang-Andersen og Bjørn Ole Haugsgjerd.
Bestemmelse av peptidstørrelsesfordeling er en helt sentral parameter for karakterisering av marine proteinhydrolysater og er dessuten svært viktig for optimalisering av hydrolyseprosessen. Den metoden som brukes idag er for unøyaktig og fører til at produsenter av proteinhydrolysat ikke har kan drive optimalt, og den gir også begrensninger på deklarasjon og salg av produktene.
Å utvikle, optimalisere og validere en ny forbedret analysemetodikk for måling av peptidstørrelsesfordeling i marine proteinhydrolysater ved bruk av HPLC-SEC (Size Exclusion Chromatography). Metodikken skal gi et bedre estimat med lavere måleusikkerhet for molekylvektsfordelingen, også for måling av de mindre molekylvektene.
Metoden kan gi produsenter av marine proteinhydrolysater et egnet verktøy for karakterisering av sine produkter, noe som er viktig med tanke på både prosessoptimalisering og salg.
Den initielle delen av prosjektet er søk etter referanser som også omfatter det siste som finnes på markedet av egnede kolonner. Utvalget av SEC kolonner vil bli testet med bruk av standarder og reelle prøver levert av norske produsenter av proteinhydrolysater. Kolonnene vil bli testet med varierende analyseparametre. Multivariate regnemetoder vil bli benyttet for tolking og klassifisering av data. Optimalisert metode vil bli validert og skal lett kunne implementeres av andre laboratorier.
Prosjektet skal etter planen løpe ut 2010, og forutsetter derfor en fullfinansering i 2010. Første del av prosjektet omfatter arbeid som var planlagt i perioden fra november 2009 til mars 2010. Dette er utsatt til september 2010. Dvs. at siste del av prosjekter starter opp oktober 2010.
Målemetoden skal være oversiktlig beskrevet i detalj og lett å implementere også for andre laboratorier.
Sluttrapport legges ut på FHFs og RUBINs nettsider.